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炭疽芽孢杆菌培养特性研究

2010-12-18 
本菌繁殖体的抵抗力不强,60℃30~60min或75℃5~15min即可杀死。常用消毒剂均能于短时间内将其杀死,如1:5000洗必泰或消毒净、1/10000新洁尔灭、1:50000度米......

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        炭疽芽抱杆菌(B·anthracis)

  炭疽芽孢杆菌惯称炭疽杆菌,是引起人类、各种家畜和野生动物炭疽 (Anthrax)的病原,在兽医学和医学上均占有相当重要的地位。

  形态及染色特性 本菌为革兰氏阳性大杆菌,1.0~1.2um×3~5um。无鞭毛,不运动。芽孢椭圆形,位于菌体中央,芽孢囊不大于菌体。可形成荚膜。DNA的G+Cmol%为32.2~33.9。

  在动物组织和血液中,此菌单在或呈2~5个相连的短链,菌体矢直,相连的菌端平截而呈竹节状,围绕以丰厚的荚膜。此荚膜因动物种类不同有所差异,在牛、绵羊体内形成的荚膜,经染色后镜检最明显,马、骡次之,猪则更次。荚膜具有较强的抗腐败能力,当菌体因腐败而消失后,仍有残留荚膜显示,称为"菌影"。在猪体内的此菌形态较为特殊,菌体常弯曲或部分膨大,轮廓不清。动物体内的炭疽杆菌只有当暴露接触空气中的氧气之后,方能形成芽孢。

  在培养基中,此菌常形成长链,并于培养18~24h后开始形成芽孢。在普通培养基中不形成荚膜,但若在血液、血清琼脂上或在碳酸氢钠琼脂上,于10%~20%CO2环境中培养则形成荚膜。在葡萄糖琼脂上生长的此菌,细胞内有不能被复红着染的球状小体。

  培养特性 此菌为需氧菌,但在厌氧条件下也可生长。可生长温度范围为15~40℃,最适生长温度30~37℃。最适pH为7.2~7.6。营养要求不高,普通培养基中即能生长良好。

  在普通琼脂上培养24h后,强毒菌株形成灰白色不透明、大而扁平、表面干燥、边缘呈卷发状的粗糙 (R)型菌落 (图22-1),无毒或弱毒菌株形成稍小而隆起、表面较为光滑湿润、边缘比较整齐的光滑 (5)型菌落。在血液、血清琼脂平板上或在碳酸氢钠琼脂上,置于5%CO2环境中培养,强毒菌株可形成圆形凸起、光滑湿润、有光泽的黏液 (M)型菌落,无毒菌株和类炭疽菌仍保持其粗糙型特点。在血琼脂上一般不溶血,但个别菌株也可轻微溶血。

  

 

  于普通肉汤申培养24h后,上部液体仍清朗透明,液面无菌膜或菌环形成,管底有白色絮状沉淀,若轻摇试管,则沉淀物徐徐上升,卷绕成团而不消散。

  在明胶穿刺培养中,细菌除沿穿刺线生长外,四周呈直角放射状生长,整个生长物好似倒立的雪松状。经培养2~3d后,明胶上部逐渐液化呈漏斗状。

  在含青霉素0.5IU/ml的培养基中,幼龄炭疽杆因细胞壁的肽聚糖合成受到抑制,形成原生质体相互连接成串,称为“串珠反应"。若培养基中青霉素含量加至10lU/ml,则完全不能生长或轻微生长。这是炭疽杆菌所特有的,可与其他需氧芽孢杆菌鉴别。

  生化特性 此菌发酵葡萄糖产酸而不产气,不发酵阿拉伯糖、木糖和甘露醇。能水解淀粉、明胶和酪蛋白。VP试验阳性,不产生叫垛和H2S,能还原硝酸盐。牛乳经2~4d凝固,然后缓慢陈化。卵磷脂酶阳性或弱反应,苯丙氨酸脱氨酶和磷酸脂酶阴性,触酶阳性。不能或微弱还原美蓝。

  抵抗力 本菌繁殖体的抵抗力不强,60℃30~60min或75℃5~15min即可杀死。常用消毒剂均能于短时间内将其杀死,如1:5000洗必泰或消毒净、1/10000新洁尔灭、1:50000度米芬在5min内可将其杀死。对青霉素、链霉素等多种抗生素及磺胺类药物高度敏感,可用于临床治疗。在未解剖的尸体中,细菌可随腐败而迅速崩解死亡。

  芽孢的抵抗力特别强大,在干燥状态下可长期存活。需经煮沸15~25min,121℃灭菌5~lOmin,或160℃干热灭菌lh方被杀死。

  实验室干燥保存40年以上的炭疽芽抱仍有活力。干燥皮毛上附着的芽孢,也可存活10年以上。牧场一旦被其污染,传染性常可保持20~30年。对于曾经掩埋炭疽兽尸的土地,必须加以严格控制。开垦后的头1~2年种植黑麦、三叶草等植物,其根系能分泌一种杀死炭疽杆菌的物质,起到净化土壤的作用。堆肥中的炭疽芽孢,需温度升至72~76℃经过4d方才死亡。常用的消毒剂是新配的20%石灰乳或20%漂白粉作用48h,0.1%升汞作用40min或4%高锰酸钾l5min。炭疽芽孢对碘特别敏感,0.04%碘液l0min即将其破坏,但有机物的存在对其作用有很大影响。除此之外,过氧乙酸、环氧乙烷、次氯酸钠等都有较好的效果。皮毛消毒可用加有2%盐酸 (可使芽孢软化增强消毒效果)的5%食盐水,于25~30℃下浸泡40h,或于室温20~25℃和相对湿度40%~68%的室内,按1:44(W/W)的比例将环氧乙烷与溴甲烷混合,以每立方米空间1.5kg的用量熏蒸24h。

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