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大肠杆菌方法培养与技巧

2010-12-18 
 细菌培养不要超过16小时,否则细菌会崩溃,引起细菌大量死亡,导致质粒丢失。有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在,经多次转接后有可能造成质粒丢失。因此不要频......

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6.加样时DNA飘出加样孔外?

  忽略或省略了高速离心以甩干残留的Rinse B的操作步骤。解决方法:按说明书的操作步骤操作以确保残留的Rinse B被甩干。

  7.为什么提出的质粒的多是二聚体和多聚体形式?

  是在质粒复制过程中形成的,与宿主菌相关,电泳可检测出。

  8.质粒为何会丢失?

  细菌培养不要超过16小时,否则细菌会崩溃,引起细菌大量死亡,导致质粒丢失。有些质粒本身不能在某些菌种中稳定存在,经多次转接后有可能造成质粒丢失。因此不要频繁转接,每次接种时应接种单菌落。另外,检查筛选用抗生素使用浓度是否正确。

  9. 大肠杆菌老化:

  请涂布平板培养后,重新挑选新菌落进行液体培养。

  10. 质粒拷贝数低:

  由于使用低拷贝数载体引起的质粒DNA提取量低,可更换具有相同功能的高拷贝数载体。

  

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