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根据临床初步诊断及待检细菌的种类，可选用不同环境条件进行培养。常用的有需氧培养法、二氧化碳培养法和厌氧培养法。为了提高检验的正确率，同一标本常同时采用两种或三种不同的培养法。
(一)需氧培养法
本法是临床细菌室最常用的培养方法，适于一般需氧和兼性厌氧菌的培养。将已接种好的平板、斜面和液体培养基等，置于35℃温箱中孵育18～24h，一般细菌可于培养基上生长，但有些难以生长的细菌需培养更长的时间才能生长。另外，有的细菌最适生长温度是28℃～30℃，如鼠疫耶尔森菌，甚至在4℃也能生长，如李斯特菌医学教|育网搜集整理。
(二)二氧化碳培养法
有些细菌初次分离培养时须置5%～10C02环境才能生长良好，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌，牛布鲁菌等。常以下列方法供给C02.
1.二氧化碳培养箱：是一台特制的培养箱，既能调节C02的含量，又能调节所需的温度。C02从钢瓶通过培养箱的C02，运送管进入培养箱内，调节好所需C02，浓度自动控制器后，将接种好的培养基直接放入培养箱中培养即可。此法适于大型实验室应用。
2.烛缸法：将已接种好的培养基置干燥器内，并放入点燃的蜡烛。干燥器盖的边缘涂上凡士林，盖上盖子，烛光经几分钟后自行熄灭，此时干燥器内C02含量约占5%～10%，然后将干燥器放入35℃温箱内培养。培养时间一般为18～24h，少数菌种需培养3～7天或更长。
3.化学法：按每升容积加入碳酸氢钠0.49和浓盐酸0.35ml的比例，分别置于容器内。将容器连同接种好的培养基都放人干燥器内，盖紧干燥器的盖子，倾斜容器使浓盐酸与碳酸氢钠接触生成C02.
(三)厌氧培养法
适用于专性厌氧菌和兼性厌氧菌的培养。常用的厌氧培养法有：①疱肉培养基法;②焦性没食子酸法;③厌氧罐法;④气袋法;⑤厌氧手套箱法。
1.细菌在肉汤培养基：混浊度(混，中等，微混，透明)、有无沉淀(粉状、颗粒状、絮状)、有无菌膜(膜状、环状、皱状)，以及气味和色素等。细菌数量达106～107CFU/ml，培养肉汤才见混浊。
2.血液培养的检查和传代培养：血液培养用的培养瓶最好先在35℃中预温，再将血液接种于培养瓶(培养基容量:血液量=10:1)，培养瓶置35℃6～18h后，用肉眼观察其生长现象，如：溶血、产生气体或混浊度等。应每天肉眼检查细菌生长情况，若为生长阳性应做进一步的分离鉴定和药敏;若为生长阴性，应孵至第7天弃去。有些细菌如奈瑟菌属和嗜血杆菌属的菌株。心杆菌属、放线杆菌属的细菌都需要较长时间培养医学教|育网搜集整理。
血培养孵育24h后，肉眼观察阴性的血培养瓶，一般不需做常规显微镜检查，因培养物中有105菌落形成单位(CFU)/ml，才能通过革兰染色检出细菌。
