细菌质粒提取方法介绍
对松弛型的质粒，可以在细菌生长的对数后期加入氯霉素抑制宿主菌蛋白的合成和染色体DNA的复制来增加拷贝数。但目前所用的质粒载体如pUC系列，采用强的改进......
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(2010-12-18)
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细菌质粒是最常用的基因工程载体，它的提取可以分为以下三步：细菌培养物的生长，细菌的收集和裂解，质粒DNA的纯化。细菌培养物是通过在含有适当浓度的抗生素的液体培养基中接种一含有所提质粒的宿主菌的单菌落，37℃,150-250rpm摇培过夜获得的。对松弛型的质粒，可以在细菌生长的对数后期加入氯霉素抑制宿主菌蛋白的合成和染色体DNA的复制来增加拷贝数。但目前所用的质粒载体如pUC系列，采用强的改进型的pMB1复制子，拷贝数能达到几百个，因此不用进行后期的氯霉素处理即可获得高产量的质粒。细菌的收集可以采用离心的方法，为了防止细菌排除的代谢废物影响质粒的纯度可以用液体培养基或生理盐水洗1-2次。细胞裂解的方法很多，如去污剂法，煮沸法，碱变性法等。这些方法各有利弊，要根据质粒的性质，宿主菌的特性及后续的纯化方法等多种因素加以选择。粗提质粒为了满足一些实验的要求还需要进一步纯化，氯化铯-溴化乙锭密度梯度离心纯化质粒DNA是可靠经典的方法。
细菌质粒的提取常采用碱裂解法，煮沸法，一步提取法以及在碱裂解法基础上的试剂盒法等。
