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糖发酵试验与同化碳源试验

2010-12-29 
具体操作:A.将豆芽汁分装杜氏小管,每管1.2ml,15磅灭菌15分钟。B.把各种糖用灭菌蒸馏水分别配成10%的糖溶液,煮沸15分钟,稍冷,用无菌吸管......

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 3.4.1 糖发酵试验

  用12.5%豆芽汁配制成2%糖溶液(棉子糖为4%)分装杜氏管。测定发酵的容器以杜氏管为主,凡能发酵某种糖则在杜氏管内小管之顶部应能看到有一定量的CO2气泡[7]。具体操作:A.将豆芽汁分装杜氏小管,每管1.2ml,15磅灭菌15分钟。B.把各种糖用灭菌蒸馏水分别配成10%的糖溶液,煮沸15分钟,稍冷,用无菌吸管吸取一定糖液,分装于杜氏管,使糖浓度达到2%(棉子糖4%),即成为糖类发酵基础培养基。C.欲鉴定的新培养菌株,接种于发酵管,25-28℃培养,每天观察结果。一般观察2-3天即可,凡不发酵者或弱发酵者,可延长观察至10天,因半乳糖酶是适应酶,故观察发酵半乳糖可延长2周至1个月[8]。

  3.4.2 同化碳源试验

  A.菌液制备:将酵母菌制成菌悬液(1ml无菌生理盐水接入少许约一接种环的新培养的酵母菌制成悬液)。B.浇制平板:将此悬液全部倒入经溶化并冷却至45℃左右的20ml基础培养基中,倒入培养皿,使菌体在培养基中混和均匀,静止,凝固后在28℃把培养皿倒置几小时,使表面不致太湿。C.点样:然后在培养皿底部做上碳源名称的标记,分别用无菌不锈钢匙或无菌药匙,按标记加糖少许(约米粒大),如果结果不明显可于第二天再补加一次糖。D.观察:观察结果时以葡萄糖作对照,一般是25-28℃培养1-2天观察结果,凡能同化者在所加碳源的周围形成生长圈。凡生长缓慢的酵母或是在测半乳糖同化时,可适当采用液体培养法,即在含某种碳源的液体培养集中接入酵母,25-28℃培养1-2周,以含葡萄糖的液体培养基作对照,观察酵母生长情况,是否更加浑浊或形成环、岛等,必要时可延长观察查到三周[9]。

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