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一、实验原理
微生物接种技术是进行微生物实验和相关研究的基本操作技能。无菌操作是微生物接种技术的关键。接种是将微生物或微生物悬液引入新鲜培养基的过程。由于实验目的、培养基种类及实验器皿等不同，所用接种方法不尽相同。斜面接种、液体接种、固体接种和穿刺接种操作均以获得生长良好的纯种微生物为目的。
分离培养微生物时，要考虑微生物对外界的物理、化学等因素的影响。即选择该类微生物最适合的培养基和培养条件。在分离、接种、培养过程中，均需严格的无菌操作，防止杂菌侵入，所用的器具必须经过灭菌，接种工具无论使用前后都要经过灭菌，且在无菌室或无菌箱中进行。
二、材料及器材
(一)菌种：大肠杆菌、枯草杆菌，金黄色葡萄球菌，酵母菌。
(二)培养基：肉汤培养基试管斜面，肉汤半固体培养基，肉汤固体培养基试管斜面，肉汤固体培养基平板，查氏培养基试管斜面，查氏培养基平板。
(三)仪器及其他工具：接种环，接种针，接种钩，镊子，酒精灯，火柴，酒精棉，试管架，标签纸，恒温培养箱等。
三、方法与步骤
(一)接种。
1.试管菌种转接：
试管细菌菌种转接主要用于菌种的活化、分离、纯化。
(1)将菌种试管与待接种的试管培养基依次排列，挟于左手的拇指与其他四指之间，用右手的无名指与小指和手掌边拔出棉塞并挟住。
(2)置试管口于酒精火焰附近。
(3)将接种工具垂直插入酒精火焰中烧红，再横过火焰3次，然后再放入有菌试管中，在管壁上停留片刻待其冷却。
(4)取少许菌种置于另一支试管中，按一定的接种方式把菌种接种到新的培养基上。
(5)取出接种工具，试管口和棉塞进行火焰灭菌。
(6)重新塞上棉塞。
(7)烧死接种工具上的残余菌，把试管和接种工具放回原处。
(8)在斜面管口写明菌种名称、日期，置37℃恒温培养18—24小时，进行观察。
2.试管菌种接种到平板培养基：
试管细菌菌种转接到平板培养基主要用于菌种的分离、纯化。
(1)左手持试管菌种，右手松动试管棉塞，烧接种工具。
(2)右手小指与手掌边取下棉塞，取菌，打开平皿。
(3)将菌种接种到平皿上，采用平板划线法(分区划线或连续划线)，然后立即盖上平皿。
(4)在酒精灯火焰上灼烧接种工具灭菌。
(5)棉塞过火，重新塞入试管。
(6)在平皿底写明菌种名称、日期，倒置于37℃恒温培养18—24小时，进行观察。
3.液体培养基接种
液体培养基接种主要用于微生物的增菌培养。
(1)用灭菌的接种环挑取细菌菌种迅速移到肉汤培养基管，涂于接近液面的倾斜的管壁上，并轻轻研磨，再直立试管，菌种即溶于肉汤中。
(2)灼烧接种环，放回原处。两试管口经火焰灭菌后塞上棉塞。
(3)在斜面管口写明菌种名称、日期，直立于37℃恒温培养24小时，进行观察。
4.半固体培养基接种
半固体培养基接种主要用于检查细菌的运动性。
(1)按试管菌种转接法握持菌种管和半固体培养基管，靠近火焰。
(2)将接种针在火焰上烧灼灭菌，冷却后从菌种管中挑取少许大肠杆菌菌苔，迅速移至肉汤琼脂半固体培养基管中。
(3)将接种针从培养基础中央垂直剌入至管底3/4处，然后原路退出。接种针不能在培养基中左右移动。
(4)试管口经火焰灭菌后，塞上棉塞。灼烧接种针。用同样方法接种一管金黄色葡萄球菌做对照。
(5)在半固体培养基管上写明菌种名称、日期，直立于37℃恒温培养24小时，进行观察。
(二)分离：
分离微生物的方法很多，其目的都是把混杂的微生物分离为单个细胞使其生长繁殖，形成单个菌落，以便得到纯菌种。本实验以平板划线法分离。
1.在无菌条件下，分别取一接种细菌放入盛有无菌水的试管中，制成混合菌液。
2.在近火焰处，左手拿平板稍抬皿盖，右手持接种环蘸取一环混合液伸入皿内划线。
3.将接种分离后的细菌放在37℃的恒温箱内，培养24h后观察。
(三)结果记录方法
(1)菌落计数 在划线的平板上，如果菌落很多而重叠，则数平板最后1/4面积内的菌落数。不是划线的平板，也一分为四，数l/4面积的菌落数。
(2)根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。
菌落特征描写方法如下：
①大小 大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。
②颜色 黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。
③干湿情况 干燥、湿润、粘稠。
④形态 圆形、不规则等。
⑤高度 扁平、隆起、凹下。
⑥透明程度 透明、半透明、不透明。
⑦边缘 整齐、不整齐
