(2010-12-11)
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注意事项：
1.克隆的新鲜程度，一定要选新鲜平板的单克隆，即刚涂布生长过夜的平板;
2.菌体的OD600值，JM109或BL21，OD值为0.35，DH5α为0.4，要尽量保证OD值不要过高，更不能超过0.6;
3.低温处理的时间，做完后冰上保存12到24h后分装，并保存于-80℃;
4.试剂和用品，非如果有可能，所有的用品(离心管、摇瓶等等)用新的，如果使用旧的，要确保干净，CaCl2溶液要过滤除菌，不要高压灭菌。
1、 -80℃冰箱保存的菌种在SOB固体平板上划单菌落;
2、次晨，挑选单克隆感至内含1ml SOB液体培养基的试管中，37℃，300rpm，6 hr;
3、然后转接到含400ml SOB液体培养基的2L摇瓶中(按1:500的量转接)，300rpm，4hr，然后每隔2 min测一次OD600，至OD600=0.76;
