(2010-12-11)
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以DH10B为例说明：
步骤1：每次做感受态都要新鲜划菌，不要使用保存于4℃或室温的平板;尽量使用原代菌，最好不要用多次传代的菌;LB平板也可以，但效率可能会降低;SOB使用GIBCO公司的试剂配制，效果最好;但若电转的连接子为一般性载体，使用普通的试剂配制培养基即可;
步骤2：该步骤与步骤3中出现的数字存在相关性，条件允许的话尽量按照要求做，不允许的话则按照实验室实际情况稍做修改，确保菌体生长良好;
步骤3：确保OD达到要求，宁可低一点，也不要高一点，建议在达到0.5后过2-3 min就测一次OD值;
步骤4：一定要在冰水混合物中快速旋转摇动内有培养物的三角瓶，尽快使培养物温度降下来，不要静置于冰水混合物中，摇动大约10 min;
步骤5：建议使用离心杯，因为其底是平的，并且灭菌时里面要装上双蒸水,利于步骤6，7与8中的悬浮操作;
步骤6：悬浮菌体时不要使用移液枪，开始时加入的水量要少，避免过多，等菌体重悬起来以后再加满。用手摇动时保证培养基液面低于冰面，重悬过程中注意悬浮的菌团出现，需将其全部分散开;
步骤7：同上
步骤8：尽量倒尽甘油，使感受态更浓，每400ml培养物制备1-1.5mL感受态为益;关于EP管预冷与-70℃的乙醇迅速冰冻的具体办法：在菌种保藏盒内加入适量的乙醇，再把空的EP管盖上帽子后放入其中，置于-70度冰箱(或-80℃冰箱)预冷，分装感受态的时候将其取出(连带保藏盒)，在超净台分装，分装时使用灭菌并剪去尖头的枪头，尽量使用1ml蓝色大枪头。完成后置于- 80℃冰箱;
步骤9：关于保存感受态的温度，- 70℃、- 80℃皆可，建议实验室现有的温度最低的冰箱;
以上方法适用于很多E.coli菌株，例如：XL1-Blue，DH10B，DH5α，Top10，JM109，BL21等做电转感受态，可能不同的菌株生长速度有差异，方案中的培养时间与最佳OD值可能有变化，不妨用此方案尝试一下，如果效率不够高的话可以对所用的菌株进一步进行优化。
注意：
1.所用的摇瓶和离心管要洗的特别干净，禁用任何洗涤剂，用NaOH溶液洗数次;2.重悬菌体用手振荡，不用振荡器;
3.用枪吸打要轻，枪头需要剪去尖头;
4.如果做的效果好，效率可以达到10*10以上。
