第十二章 杂环类药物的分析
第一节 异烟肼的分析
本类药物母核吡啶环上的氮原子为碱性氮原子，吡啶环γ位上被酰肼取代，酰肼基具有较强的还原性，并可与某些含羰基的试剂发生缩合反应。
一、鉴别试验
1.制备衍生物测定熔点
酰肼基与芳醛缩合形成腙，析出结晶，可测定其熔点。最常用的芳醛为香草醛。
2.银镜反应 取异烟肼约10mg，置试管中，加水2ml溶解后，加氨制硝酸银试液1ml，即发生气泡与黑色浑浊，并在试管壁上生成银镜。
3.红外光谱
二、异烟肼中游离肼的检查
异烟肼是一种不稳定的药物，其中的游离肼是由制备时原料引入，或在贮存过程中降解而产生。而肼又是一种诱变剂和致癌物质，因此国内外药典多数规定了异烟肼原料药及其制剂中游离肼的限量检查。中国药典对异烟肼原料和注射用异烟肼中游离肼的检查均采用薄层色谱法。
检查方法 取本品，加水制成每1ml中含50mg的溶液，作为供试品溶液。另取硫酸肼加水制成每1ml中含0.20mg（相当于游离肼50μg）的溶液，作为对照溶液。吸取供试液10μl 与对照溶液2μl，分别点于同一硅胶薄层板（用羧甲基纤维素钠溶液制备）上，以异丙醇－丙酮（3:2）为展开剂，展开后，晾干，喷以乙醇制对二甲氨基苯甲醛试液，15min后检视，在供试品主斑点前方与硫酸肼斑点相应的位置上，不得显黄色斑点。
异烟肼斑点呈棕橙色的清晰斑点，rf值约为0.21。游离肼斑点呈鲜黄色，rf值约为0.3。本法检出肼的灵敏度为0.1μg，检出限量约为0.02%。
三、含量测定
异烟肼具有还原性，可用氧化还原滴定法测定含量。中国药典采用溴酸钾法，用甲基橙指示剂指示终点；等当点过后稍过量的溴酸钾氧化甲基橙使其粉红色消失。采用本法测定异烟肼片和注射剂的含量。
第二节 硝苯地平的分析
具有1,4-二氢吡啶母核。苯环上硝基取代，遇光不稳定，易发生自身氧化还原反应。
一、鉴别
1．与naoh试液反应：加20％naoh溶液，振摇显橙红色
2．紫外分光光度法
3．红外分光光度法
二、检查
1．有关物质：易发生光化学岐化反应，降解为硝苯吡啶衍生物及亚硝苯吡啶衍生物。采用hplc检查，限量分别为0.2％，杂质总量不得大于0.5％。检查时避光操作。
2．一般杂质
三、含量测定
硝苯地平具有还原性，可在酸性溶液中用铈量法直接滴定，以邻二氮菲为指示剂。
第三节 诺氟沙星及其制剂的分析
一、诺氟沙星的分析
（一）鉴别
1．薄层色谱：对照品对照
2．hplc
（二）检查
有关物质：hplc，自身稀释对照
（三）含量测定
hplc，外标法计算。流动相中加入适量三乙胺扫尾剂，可克服拖尾现象。
二、诺氟沙星制剂
1．软膏和乳膏剂：紫外分光光度法，对照品比较法
软膏基质干扰测定，利用其溶于三氯甲烷，药物有羧基溶于naoh的性质进行处理。加三氯甲烷溶解供试品后，用naoh溶液提取药物进行测定。
2．胶囊：紫外分光光度法检查溶出度，hplc测定含量
第四节 盐酸氯丙嗪和奋乃静的分析
分子结构中具有共同的硫氮杂蒽母核，10位上的取代基，为具有2-3个碳链的二甲或二乙胺基，或为含氮杂环如哌嗪的衍生物等。具有紫外特征吸收，最强峰多在250nm～265nm。遇不同氧化剂例如硫酸、硝酸、三氯化铁试液及过氧化氢等，易被氧化呈色。
一、鉴别
(一)盐酸氯丙嗪的鉴别
1.氧化反应
吩噻嗪环可被不同氧化剂如硫酸、硝酸氧化而呈色。如加硝酸5滴显红色，渐变为黄色。
2.紫外吸收光谱
氯丙嗪在254nm和306nm有最大吸收，在254nm吸收度约为0.46。
3.cl－反应
沉淀反应 与硝酸银生成白色沉淀，可溶于氨试液
氧化反应 与二氧化锰硫酸反应产生氯气，使湿润淀粉碘化钾试纸变蓝。
4.红外光谱
(二)奋乃静的鉴别
1.氧化反应 被过氧化氢氧化呈深红色
2紫外吸收光谱
奋乃静在258nm8有最大吸收，吸收度约为0.65。
3.红外光谱法
二、有关物质检查
(一)溶液澄清度和颜色
澄清度 控制游离氯丙嗪
颜色 控制氧化产物的量
(二)有关物质
控制合成的原料氯吩噻嗪和间氯苯胺等。采用薄层色谱法自身稀释对照法检查。限量1.0%。
奋乃静采用薄层色谱法自身稀释对照法检查，规定限量3.0％
三、盐酸氯丙嗪及其制剂的含量测定
(一)盐酸氯丙嗪
1.原料药 非水溶液滴定法
侧链脂氨基具有碱性。由于为盐酸盐，滴定前加入一定量的醋酸汞试液，使生成难离解的氯化汞，在进行滴定
2.片剂 紫外分光光度法
在波长254nm测定吸收度，按吸收系数法测定标示量百分含量。
3.注射剂 紫外分光光度法
维生素c在243nm有最大吸收，为防止抗氧剂维生素c干扰，在306nm波长处测定。
四、奋乃静及其制剂的含量测定
1.原料药 非水滴定法
2.片剂 紫外分光光度法，对照品比较法计算含量
3.注射剂 萃取后非水滴定法
由于溶剂水对测定有干扰，所以加氢氧化钠试液碱化后，用氯仿提取药物，挥干氯仿，照原料药方法测定。
第五节 地西泮和奥沙西泮及其制剂的分析
二氮杂卓七元环上氮原子具有强的碱性，具有明显紫外吸收。
一、鉴别
(一) 地西泮
1.硫酸-荧光反应 药物溶于硫酸后，在紫外光(365nm)下，呈现黄绿色荧光。
2. 紫外和红外吸收光谱
3. 氯元素反应 本药物为有机氯化合物，用氧瓶燃烧法破坏，生成氯化氢，以5%氢氧化钠溶液吸收，加硝酸酸化，显氯化物反应。
(二) 奥沙西泮
1.水解后重氮化-偶合反应 盐酸酸性条件下，缓缓加热煮沸，水解生成二苯甲酮衍生物，具有芳伯氨基。加亚硝酸钠和碱性β-萘酚试液，生成橙红沉淀。
2.紫外光谱和红外光谱
二、有关物质检查
1．地西泮：在生产工艺过程或贮藏期间出现分解，产生2－甲氨基－5－氯二苯酮杂质。用hplc，不加校正因子的主成分自身对照法检查杂质。
2．奥沙西泮：薄层色谱，溶液自身稀释对照法
三、含量测定
1．地西泮：二氮杂卓七元杂环上氮原子的弱碱性，可用非水溶液滴定法测定其含量
2．奥沙西泮：紫外分光光度法
四、地西泮制剂分析
（一）片剂
1．检查
有关物质：薄层色谱，溶液自身稀释对照法，限量0.5％
含量均匀度：紫外分光光度法，284nm
溶出度：紫外分光光度法，242nm测定，吸收系数大，灵敏度更高
2．含量测定：紫外分光光度法，284nm
（二）注射液
1．有关物质：hplc，主成分自身对照法
2．含量测定：地西泮注射液处方中苯甲酸、苯甲酸钠等附加剂有干扰，用hplc法。此法操作简便、可消除干扰。
