(2010-10-19)
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分子杂交基本原理：
(一)DNA变性：
DNA变性是指双螺旋之间氢键断裂，双螺旋解开，形成单链无规则线团，因而发生性质改变(如粘度下降，沉降速度增加，浮力上升，紫外吸收增加等)。
1、DNA变性的方法：
1)加热;
2)改变DNA溶液的pH;
3)有机溶剂(如乙醇、尿素、甲酰胺及丙酰胺等)等理化因素。
2、增色效应：DNA在260nm处有最大吸收值，这一特征是由于含有碱基的缘故。在DNA双螺旋结构模型中碱基藏于内侧，变性时由于双螺旋解开，于是碱基外露，260nm紫外吸收值因而增加，这一现象称为增色效应(hyperchromiceffect)。利用DNA变性后波长260nm处紫外吸收的变化可追踪变性过程。
3、溶解曲线：如果升高温度使DNA变性，以温度对紫外吸收作图，可得到一条曲线，称为溶解曲线。
4、融解温度：通常人们把50%DNA分子发生变性的温度称为变性温度(即熔解曲线中点对应的温度)，由于这一现象和结晶的融解相类似，故又称融点或融解温度(meltingtemperature，Tm)。因此Tm是指消光值上升到最大消光值一半时的温度。
5、影响Tm值的因素：Tm不是一个固定的数值，它与很多因素有关：
1)部因素：pH、离子强度。随着溶剂内离子强度上升，Tm值也随着增大。
2)部因素：DNA的碱基比例、DNA的均一性;在相同条件下，DNA内G-C配对含量高，其Tm值也高。
6、DNA中的GC含量与Tm值关系：
Tm=69。3 0。41×%(G C)
对于小于20bp的寡核苷酸，Tm=4(G C) 2(A T)
实验表明DNA分子中(G C)克分子含量百分比的大小与Tm值的高低呈直线关系。
