实习工厂 大庆油田化学剂及水处理质量检验中心 实习时间2012年8月1日至2012年8月21日
考核成绩 优秀 指导老师 刘广民
生产实习是学校为锻炼本科生能力，让我们能更好的与社会相适应而组织的大三本科生的生产实习活动。接到要去生产实习的通知后，我很高兴，并积极联系，终于将实习地点定在大庆油田水处理与化学研究所。这是因为：首先，水化室的主要工作是油田水处理，化学剂量开发及检验，和我们的专业有一定的关系;其次，我们的课程当中并未涉及到有关水生细菌的详细知识，在这里进行生产实习可以扩展这方面的知识;我们在实验中所学习的操作方法可以得到应用基于以上几方面的原因，我选择在水处理所开始我的生产实习。
水处理与化学研究所隶属于大庆油田工程设计开发有限公司，原名大庆油田建设设计水处理及油田化学研究室位于黑龙江省大庆市让胡路区油田设计院。多年来研制出原油破乳剂、油田清防蜡剂、油田防蜡剂、原油降粘剂、原油消泡剂、污水絮凝剂、防垢剂、缓蚀剂等12个系列40余种油田化学剂。
该所现有高中级职称的专业人才32人，博士2人，硕士8人。XX年通过了国家级计量认证。同年与哈尔滨工业大学强强联合，成立了哈尔滨工业大学环境科学与工程大庆研发中心。拥有研究仪器设备100多台，其中进口设备占60%实验室总面积为3000平方米。微生物实验室，可进行菌种培养驯化分离。拥有国内规模装备最为先进的三次采油实验室，可进行各种除油及过滤工艺和设备试验可自动合成的高压聚合反应实验室。
由于我的实习时间只有三个星期，故在刘老师的安排下对SRB做些认知性的实习，以下为我的主要实习内容
大致了解实验室自XX年开始启动的SRB抑制课题的一些工艺原理流程
硫酸盐还原菌是导致大庆油田地面系统产生硫化物从而造成设备腐蚀、滤料污染等危害的根源;实验室立足于微生物生态抑制，改变以往追求杀灭SRB数量的目的，转而以抑制SRB活性为目的,是大庆油田系统控制SRB危害的新方法，可降低生产运行成本
本研究采用的折流板反应器有7个单元格，每个单元格长*宽*高=9.5cm*12cm*42cm,有效体积4.4L,单元格内装1/3高度的活性污泥.反应器上部为排气孔，排气孔的导气管伸到水封瓶液面以下，保持整个系统厌氧状态.
水箱中的水通过泵泵入反应器，以推流形式流过各单元格，并从反应器流出。
反应器的启动与运行
将含有大量的硫酸盐还原菌的厌氧污泥，接种到反应器中;
现阶段，反应器进水为配制的模拟水，在自来水中加入碳源、硫酸钠、少量复合肥，用碳酸氢钠调节碱度;浓度：COD=1800mg/L,SO42-=600mg/L左右;进水流量46L/d, 每个单元格水力停留时间=2.3hr
一、微生物镜下观察
G氏染色
步骤为：涂片→固定→结晶紫色染色→水洗→碘液媒染→水洗→酒精脱色→番红复染→水洗→干燥→观察。
涂片 与单染色法相同。
固定 与单染色法相同。
结晶紫染色 染色1分钟，然后水洗并用吸水纸吸干。
碘液媒染 染色1分钟，然后水洗并吸干。
酒精脱色 用95%酒精脱色，直到酒精不出现紫色时即停止，然后立即水洗，并吸干。
番红复染 染色3分钟左右，然后水洗并吸干。
镜检 在显微镜油镜头下观察，菌体显蓝紫色的为革兰氏阳性菌;菌体显红色的为革兰氏阴性菌。
SRB为革兰氏阴性菌
二、厌氧型为生物的培养
1.SRB菌
采用
Hungate厌氧操作技术、绝迹稀释法以及“滚管”培养对样本进行分离，多次纯化获得纯菌株SRB。
具体方法：向改良后Starkey培养基中加入0.2%的刃天青溶液，培养基煮沸后，加入L-半光盐酸盐0.5g，通入高纯氮气驱氧30min，121℃灭菌20min，固体培养基加入16%的琼脂糖。
单独配 3%的FeSO4?(NH4)2 SO4 厌氧
SRB菌株于液体培养基中37℃培养48h 后, 在Olympus COVER-018光学显微镜下革兰氏染色观察。
2.DNB菌
方法同
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SRB菌，PH值最好在7，
药品：
(NH4 ) 2SO4 3 g, KCl 0.1 g, K2HPO4 0.5 g, M gSO4?7H2O 0.5g,
Ca (NO3 )2 0.01 g, FeSO4?7H2O 8.0 g, 蒸馏水1 000 mL
121℃灭菌15 m in。
恒温摇床培养箱振荡培养
由于此项操作开始时间较晚，至实习结束，菌落还未完成一个完整周期的培养。
三、水生细菌的计数
1.血球板计数法
取样：先清洗一个容量为100毫升的取样瓶或烧杯。取样前轻轻振荡试管搅拌，待分布均匀后，立即用注射器针管取样，取样的量为1毫升。加蒸馏水100倍稀释。
样品放于计数板：放置前必须将血球计数板和盖玻片清洗干净、擦干，不能有油污染和杂质。将血球计数板平放在桌子上，盖好盖玻片;然后把样品瓶轻轻摇动几下，菌分布均匀，并立即用干净的微吸管取样品，迅速把微细吸管放到盖玻片的边缘处，轻压微细吸管的橡皮帽，使样品流入计数板内。注意控制样品流入量，不能过多，过多则流入到沟内;也不能过少，过少则计数时不准确，应充满画线方格及其周边部分。还应注意盖玻片下不能有气泡存在，否则会造成计数不准确。样品吸入血球计数板后，稍停1分钟，待细菌沉降在玻片表面上再在显微镜下进行计数。
计数：计数中央大格的4个角的中格，每个中格有25个小格，逐一计数，4个中格相加共计数100个小格。计数时应从计数框一角开始，在计数框边缘的标本应按"计上不计下、计左不计右"的原则，计数出细菌的总量后，按下式计算出每毫升菌液中的细菌数量：细菌数量=100个小格的细菌数×4×10000×稀释倍数。
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